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准备一、无菌室和分离用器具的灭菌和消毒 分离菌种的操作过程，应该在很清洁的条件下严格按照无菌操作技术进行，无菌室、无菌箱或洁净工作台都应保持清洁，必要时可用0.1%的升汞溶液或70%的乙醇擦拭工作台。微生物一般都是附着在尘埃上、悬浮于空气中，可在室内喷雾或煮沸沸水的方法，使空气中水汽饱和，尘埃与水滴同时降落，除去空气中的微生物。分离时所用的培养皿、刀剪、接种铲等用具及工作人员的工作服都应进行无菌处理，操作时不能在操作间走动，防止带来杂菌。 准备二、消毒液的配制 ①无菌水。无菌水即为高压灭菌后的自来水。将适量的自来水装入三角瓶中，塞好棉塞，然后进行高压灭菌，装入水量不宜太多，防止高压灭菌时弄湿棉塞。无菌水不应保存时间太久，防止污染。 ②常用的消毒液。0.1%升汞溶液、漂白粉、70%的酒精溶液。此外，5%福尔马林、3%过氧化氢、2%高锰酸钾等都可用做表面消毒，处理时间和浓度因材料不同而异，处理后都应用无菌水冲洗。 ③排除细菌污染。细菌污染是分离真菌的大敌，目前抑制细菌生长有效的方法是在培养基中加入适当的抗生素。加金霉素（30微克/毫升）可抑制多数细菌生长，加青霉素（2微克/毫升）可抑制革兰氏阳性细菌生长，加多黏菌素B（0.5微克/毫升）可抑制革兰氏阴性细菌生长，加链霉素40微克/毫升和氯霉素50微克/毫升可以抑制大部分细菌生长，除氯霉素可在制作培养基时灭菌前加入外，其他抗生素都应在培养基灭菌后冷却到45℃左右时再加入。此外，可调节培养基的pH，酸性培养基对大部分细菌都有抑制作用，而并不影响真菌生长。 | 
